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    发布时间: 2018 - 12 - 10
    英文标题:Selection and Validation of Novel RT-qPCR Reference Genes under Hormonal Stimuli and in Diferent Tissues of Santalum album杂志:Scientific  Reports影响因子:IF=4.122摘要   逆转录实时定量聚合酶链式反应 (RT-qPCR)因其高通量、特异性和敏感性而被广泛应用于基因表达水平的研究。为了获得准确可靠的结果,RT-qPCR分析必须有一个合适的参考基因。到目前为止,经济热带树种檀香((Santalum album L.)还没有被验证的可靠参考基因。在本研究中,有13个候选参考基因(包括从大量的檀香转录组数据中筛选出的12个新的可能的参考基因,以及目前使用的β-actin基因)在不同的组织(茎、叶、根和愈伤组织)、以及水杨酸(SA)、茉莉酸甲酯 (MeJA)、赤霉素(GA)处理作用下的愈伤组织中,用GeNorm,NormFinder,BestKeeper,Delta CT和 RefFinder算法综合验证。几种新的候选参考基因比目前使用的传统基因ACT要稳定得多。SA处理中ODD和Fbp1、MeJA处理中的CSA 和Fbp3、JA处理中的PP2C和Fbp2、以及3个激素处理中FBP 1和FBP 2,分别是最准确的参考基因。当FAB1A与PP2C结合后,被鉴定为四种组织最适宜的参考基因组合。而HLMt, PPR和FAB1A的组合则是所有实验样本中最理想的参考基因。此外,为了验证我们的结果,我们还通过参考基因及他们的组合在MeJA处理下的三种檀香组织中评估了SaSSy基因的相对表达水平。本研究中所鉴定的参考基因将提高RT-qPCR分析的准确性,并将有...
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    发布时间: 2018 - 12 - 03
    发表期刊:Microbiome影响因子:9.133(SCI一区)研究背景最近几年,对肠道微生物群(GM)的研究已经不仅仅是描述分类组成,通常是将16S rRNA基因测序应用于粪便样本,更广泛地研究GM的功能潜力,这是通过鸟枪法宏基因组学(MG)方法实现的。群体MG研究表明,尽管存在较大的个体间结构/组成变异,GMs仍有一组稳定的核心功能。然而,由于测序的基因不一定表达,MG不能提供可靠的信息,说明哪些微生物的功能特征实际上在响应宿主代谢、免疫、神经生物学、饮食或其他环境因素的刺激而发生变化。相反,这类信息可以由功能宏组学收集,如宏转录组学(MT)和宏蛋白质组学(MP),它们对微扰具有较高的敏感性,因此可能更好地反映宿主微生物相互作用。在这方面,特别令人感兴趣的是调查人类群体中潜在的和实际活跃的GM特征之间的关系,为了从已知的MG的潜能开始鉴定在健康肠中组成型表达的微生物功能。最近的一项研究已经针对MT实现了这一目标,在具有最高表达率(mRNA/DNA比率)和参与淀粉代谢,氨基酸生物合成,孢子形成和以及具有最低表达率的肽聚糖生物合成的基因中发现了核糖体蛋白和柠檬酸循环酶的转录物。人们对微生物蛋白的了解较少,尽管它们提供了有关GM代谢的主要信息,并且代表了宿主-GM相互作用中的关键分子。尽管有一些开创性的研究提出了对疾病有关的人类群体中的宏基因组和宏蛋白组的分析,到目前为止,还没有系统地、比较地调查健康人群的分类学和功能特征,这种特征可能和实际由GM表达。材料与方法01实验设计图1本研究的实验设计注:从临床监测的撒丁岛人群中选出15名健康成人(男性7名,女性8名)。从每个人身上采集粪便样本,同时进行Illumina鸟枪法DNA测序(宏基因组)和LTQ-Orbitrap鸟枪法质谱分析(宏蛋白组)。宏基因组学也被用作序列数据库,以便进行严格的宏蛋白质组/宏基因组比较,并进行分类和功...
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    发布时间: 2018 - 11 - 26
    摘要全转录组范围内鉴定能与蛋白结合的RNA(RBPs),是了解转录后基因调控网络的必要条件。然而RBPs蛋白组的研究主要局限于多聚腺苷酸的RNA与蛋白的结合,对于没有ploy-A尾的RNA(主要的是非编码RNA和RNA前体)几乎都没发现。本文介绍了一种点击化学(主旨是通过小单元的拼接,来快速可靠地完成形形色色分子的化学合成。它尤其强调开辟以碳-杂原子键(C-X-C)合成为基础的组合化学新方法,并借助这些反应(点击反应)来简单高效地获得分子多样性。)辅助的RNA互作捕获策略(CARIC),能够对RBPs进行无差别鉴定,不受RNA是否具有ploy-A尾的约束。CARIC主要是利用炔基尿苷类似物对RNA进行标记,并在活体内进行RNA-protein光照交联,然后与叠氮化物生物素进行点击化学反应,亲和富集后进行蛋白组分析。利用CARIC在人的宫颈癌细胞中鉴定到597个RBPs,包括130个之前未知的RBPs。这些新发现的RBPs可能是和非编码RNA结合的,因此发现了一些之前未知的非编码RNA参与的过程(例如蛋白酶体功能和中间代谢)。材料方法实验材料:人的宫颈癌细胞,胚肾细胞;质粒构建和细胞转染:克隆宫颈癌细胞cDNA(hnRNPC,MBNL1,VDAC1,NME2),克隆质粒:VigoFect;几种已知RPBs用来验证CARIC技术成功率CARIC分离出的RNA测序:Illumina HisEq 4000 PE150;蛋白质谱检测:LC-MS/MS,Easy nLC 1000 system +Velos Pro Orbitrap Elite mass spectrometer;质谱数据分析:MaxQuant version 1.5.5.1(原始数据分析),依靠人的蛋白数据(UniProt)Andromeda search engine进行蛋白查询;CARIC RBPs验证:CLIP...
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    发布时间: 2018 - 11 - 09
    前沿慢性阻塞性肺病(COPD)是一种炎性疾病,其特征在于进行性空气流量限制,并且被认为部分地由于响应于慢性空气污染物暴露(主要来自吸烟)而引起的夸大的肺部炎症。目前可用的治疗方法在很大程度上是无效的。因此,有效治疗COPD迫切需要新型的治疗药物。前期系统药理学鉴定了补肺益肾方(BYF)的195种潜在靶点,并被证实对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠有短期治疗作用。然而,对慢性阻塞性肺疾病(COPD)的长期疗效及机制尚不清楚。因此,本研究以慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠为研究对象,于第9~20周给药。然后通过转录组学-蛋白质组学-代谢组学分析第32周BYF对慢性阻塞性肺病大鼠的长期影响。材料与方法样本收集第0-8周构建COPD大鼠模型,将32只大鼠置于一个暴露于烟草和反复肺炎克雷伯菌感染的封闭的盒子里,第9-20周大鼠每日灌胃给予生理盐水(2mL)、BYF(4.44g/kg,0.5g/ml)和氨茶碱(2.3mg/kg)。检测方法转录组:Microarray(4×44K)大鼠全基因组表达谱芯片;蛋白组:8-plex iTRAQ,NanoLC-QTOF-MS;代谢组:Agilent-1200 LC-Agilent-6520 Q-TOF;数据分析Agilent GeneSpring GX software version 11.0Mascot:蛋白质鉴定Mass Hunter:代谢物鉴定SIMCA-P:PLS-DA基因、蛋白质和代谢物集富集、网络和通路分析Bingo(CytosCapev3.1.1插件)用于分析转录本和蛋白质的分子功能;DAVID和KEGG数据库对转录本和蛋白质进行途径富集分析。Metscape用于分析基因、蛋白质和代谢组学数据的整合途径;ClueGO(Cytoscape插件被用来探索基因和蛋白的分子功能。MetaboAnalyst 3.0被用来确定代谢物...
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    发布时间: 2018 - 11 - 08
    砷暴露对小鼠肠道宏基因组和代谢谱的响应IF=8.3091.摘要背景:人类肠道是一个极其复杂、多样和庞大的微生物群落-肠道微生物群。肠道微生物群在代谢过程、能量产生、免疫和认知发育、上皮稳态等方面发挥着重要作用。然而,肠道微生物群的组成和多样性很容易受到外界因素的影响,这就增加了接触有毒环境化学物质导致肠道微生物群改变或失调的可能性。砷的暴露影响全世界的大量人口,并且与许多疾病有关,包括癌症,糖尿病和心血管疾病。目的:研究了砷暴露对肠道微生物组成及其代谢状况的影响。方法:采用16S rRNA基因测序和质谱代谢组学分析相结合的方法,研究砷暴露对肠道微生物群的功能影响。结果:16S rRNA基因测序结果表明,10 ppm砷暴露4周后,砷对C57BL/6小鼠肠道微生物组分有明显的干扰作用。此外,代谢组学图谱显示了一种并行效应,许多肠道菌群相关的代谢物在多个生物基质中被干扰。结论:砷的暴露不仅改变肠道微生物群落的丰度水平,而且在功能水平上也严重干扰其代谢状况。这些发现可能为肠道微生物群的微扰及其作为接触砷导致或加重人类疾病的潜在新机制的作用提供新的见解。2.材料和方法动物和处理:无特定病原体的C57BL/6雌性小鼠20只(6周龄,体重20±3g)。平均分为两组。两组小鼠在同样的环境条件下饲养,供给相同的食物和水。饲养到8周龄后,处理组:饮用水中注入无机砷(亚砷酸钠,10ppm)持续四周;对照组:依旧供给清水。在整个实验过程中,每天评估小鼠腹泻,脱水和身体状况恶化的情况。用砷4周后,用二氧化碳对小鼠实施安乐死并进行尸体剖检。对肝脏(左侧,内侧,右侧和尾状叶)和结肠(远端,横向和前期结肠)的多发区域的炎症,水肿,上皮缺损,高血浆和发育异常等指标进行评估。病理评分未显示对照组和砷治疗组小鼠之间存在任何显着差异,也未观察到体重,死亡率和食物摄入量的任何显着变化。16SrRNA测序数...
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    发布时间: 2018 - 10 - 30
    文章题目:A strategy for association study on intestinal microbiomeand brain metabolome across lifespan of rats.杂志:Analytical  Chemistry 影响因子:IF=6.0421摘要   人们越来越认识到微生物群-肠-脑轴在哺乳动物一生中对哺乳动物生长和健康的不同作用。大量研究表明,肠道微生物群及其代谢物广泛参与脑与肠的沟通。脑代谢组与肠道微生物的关联研究是一个活跃的领域,它提供了大量关于微生物、脑和肠道相互作用的信息,但数据大小和复杂的层次关系是形成重要的、可重复的结论的主要障碍。本研究采用多种分析平台和生物信息学方法,对雄性Wistar大鼠在生长过程中的脑代谢和肠道微生物群关联分析进行了两级策略的研究。轨迹分析表明,与年龄相关的脑代谢组和肠道微生物在总体变化模式上具有相似性。 四个高水平分类的相关对“代谢类型—细菌门”包含“脂质-螺旋菌”、“游离脂肪酸-厚壁菌门”、“胆汁酸-厚壁菌门”、“神经递质-拟杆菌门”在单元-多元相关分析和功能分析的基础上被筛选出。进一步鉴定了上述高水平关键对中的四组特异性“代谢产物-细菌”关联对。通过一项独立的动物研究验证了关键相关对的有效性。这种两级策略有效地识别了从系统多组学研究中获得的大数据集中的主要相关性,加深我们对大脑和肠道之间终生联系的理解。材料与方法动物材料:正常生长实验取出生后第1、3、7、12、24、56、111周的雄性大鼠全脑和肠内容物,每组6只,共42只。      在限制饮食验证实验中,12只雄性大鼠(4周龄)被喂食3周,然后6只(随机选择)饲喂Libitum,其余6只饲喂60%的Libitum 5周...
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比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系

日期: 2018-02-02
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      文章标题:Comparative Transcriptomic Analysis Reveals That Ethylene/H2O2-Mediated Hypersensitive Response and Programmed Cell Death Determine the Compatible Interaction of Sand Pear and Alternaria alternata

       期刊:Frontiers in Plant Science

影响因子:IF=4.495.

发表时间:2017年2月.

作者单位:

Institute of Horticulture, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences/Jiangsu Key Laboratory for Horticultural Crop Genetic Improvement, Nanjing, China,

Department of Plant Sciences, University of California at Davis, Davis, CA, USA,

Crops Pathology and Genetics Research Unit, United States Department of Agriculture, Agricultural Research Service, Davis, CA, USA.

 

摘要:

沙梨(Pyrus pyrifolia)生产的主要限制因素是由死体营养型真菌-互生交链孢霉引起的黑斑病。然而,梨对互生交链孢霉的分子水平反应机制未知。本文研究了抗性品种CuiguanCG)和易感品种Sucui1SC1)对互生交链孢霉感染的宿主响应。使用RNA-Seq技术在互生交链孢霉感染的早期鉴定了CGSC1之间的大量差异表达基因(DEGs)。K-mean聚类和Mapman分析显示,易感品种SC1中,参与乙烯(ET)生物合成和ET信号通路的基因(如ACSACOsERFs),以及过敏反应(HR)和程序性细胞死亡(PCD)的基因显着富集。抗性品种CG中,接种真菌后,响应过氧化氢和超氧化物的基因上调。SC1中,ET水平极高。CG中,解毒酶(例如过氧化氢酶)活性更高。研究结果表明,ET- / H2O2介导的PCD和解毒过程在梨和互生交链孢霉的互作中发挥重要作用。

 

材料与方法:

材料七年生的沙梨树(Pyrus pyrifolia)“Cuiguan”(CG)和“Sucui 1”(SC1),从果园收集叶子用于接种测定。

取材方法25℃下,互生交链孢霉在马铃薯葡萄糖琼脂平板上的生长7天。用蒸馏水漂洗菌丝体获得分生孢子悬浮液。用针刺穿叶的近轴表皮,沿中心静脉的两侧形成四个感染部位,并接种。用灭菌蒸馏水作为模拟对照。将接种和模拟处理的叶在25℃的黑暗条件下孵育。接种后每天评估真菌生长过程的疾病严重性和疾病发生率。每次处理使用至少20片叶。实验重复5次。在接种后0,1,2,35天收集叶子用于RNA-seq

 

测序策略和分析流程:

测序:Illumina HiSeq2500。PE 100bp。每个时间点混合10片叶子,设置3个生物学重复。共30个样本。

分析:序列处理和差异表达基因分析;

  激素测量:气相色谱仪监测ET(乙烯)释放;

  H2O2、O2-和抗氧化酶活性测量;

  qRT-PCR分析

 

结果:

1、 在CG和SC1上接种A. alternata

(A)接种A. alternataCGSC1的代表性表型。

(B)CGSC1分枝顶部的第四叶的病害发生率(具有扩大病变的接种部位的百分比)。

(C)CGSC1分枝顶部的第四叶的疾病严重性(扩张损伤的直径)。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

2、 RNA-Seq转录组数据的序列比对和表达分析

在接种后不同时间点,30个样品中比对到沙梨和A.acalata参考基因组的比率。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

在给定时间点CG和SC1中的独有和共有的差异上调(A)和下调(B)的unigenes个数。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

3、 时间表达谱分析

通过k-mean分析,5个阶段前10GO term的基因的表达谱。

(A)CG中上调;(BCG中下调;(C)SC1中上调;(DSC1中下调。

与过氧化氢、超氧化物、碳水化合物的响应相关的基因在抗性基因型CG中显著上调,但在易感基因型SC1中不显着上调。JAABA介导的信号传导途径和反应创伤和ETSC1中的显着上调,在CG中下调。包括“光合作用”、“多糖生物发生”、“细胞壁组织”的生物过程在SC1中显著下调。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

4、 转录因子分析

显示CG和SC1对生物胁迫的转录反应。使用Mapman软件显示具有显着差异表达的基因,并分成不同功能类别(BIN)。蓝色表示减少,红色表示增加。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

5、 乙烯含量鉴定

在给定时间点,测量CG和SC1的接种叶中ET水平。在SC1中,ET水平比CG高得多。1dpi后持续增加,在5dpi达到峰值。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

6、 激素生物合成途径的基因表达

CG和SC1中响应A. alternata感染的乙烯合成基因ACO1(A)和茉莉酸合成基因AOCB)的表达。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

7、 H2O2和抗氧化酶的活性分析

CG和SC1中响应A. alternata感染的H2O2和抗氧化酶的活性。在给定时间点测量CG和SC1的接种叶中O2-A)、SODB)、H2O2C)和CATD)的水平。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

8、 qPCR验证

通过qPCR验证CG(A)和SC1B)的RNA-seq数据。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

9、 模拟ET和H2O2介导的通路,确定沙梨和A. Alternata的相互作用

当沙梨遇到病原体时,ET生物合成(ACSACO)和ET信号通路(ERF)被触发,并且诱导H2O2O2-产生。因此,发生过敏反应(HR)和程序性细胞死亡(PCD),并成功感染SC1ET生物合成和ET信号通路被抑制时,诱导CATH2O2分解成水和氧。随后,CG对病原体进行抗性应答。R,抗性基因型CGS,易感基因型SC1;红色,上调表达或酶水平升高;绿色,下调表达或酶水平降低。

比较转录组分析揭示沙梨和互生交链孢霉的互作关系 

 

亮点分析:

1、本文分析了互生交链孢霉感染沙梨期间的过敏反应和程序性细胞死亡、乙烯生物合成的作用、抗氧化酶的作用,最终揭示了沙梨对互生交链孢霉感染的抗性反应。


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