服务热线: 025-85381280
专业领域 更多
优秀案例 / Case 更多
  • 浏览次数: 20
    发布时间: 2019 - 03 - 13
    合作单位:江苏大学食品与生物工程学院发表期刊:Food Chemistry影响因子:4.946(SCI二区)研究背景:桔霉素(citrinin,CIT)是一种次生代谢物,最初由桔青霉Penicillium citrinum生产。后来发现它是由曲霉属、红曲属、青霉属等产生的。一些农业食品中报告了CIT的污染情况,包括大米、奶酪、小麦、苹果和其他商业食品。食品中的CIT污染不仅造成重大经济损失,而且对人们构成肾毒性威胁。实验目的:比较10μg/mL CIT处理和不处理Cryptococcus podzolicus Y3的转录和蛋白质组,以揭示酵母对CIT的防御反应及CIT降解的分子机制。实验取材:CIT处理和不处理Cryptococcus podzolicus Y3酵母菌株组学:转录组学和蛋白组学主要研究成果01蛋白的差异表达分析在每个凝胶中总共检测到102个差异表达的蛋白质(平均fold change>1.2)。其中42个差异显著表达蛋白(平均fold change2,p2,p02差异表达蛋白的WEGO分类对所有已鉴定的蛋白质进行了GO功能注释分析,其中被鉴定为细胞和代谢过程的蛋白质为第1位,其次是生物调节和对刺激的反应。所涉及的许多细胞成分是细胞器、细胞成分和生物大分子。结合和催化功能是分子功能中识别最多的蛋白质,其次是抗氧化蛋白、电子携带蛋白、转运蛋白等。03基因的差异表达分析共获得了43928个转录物和17088个unigenes,其N50值分别为2844和2219(补充表S2)。所有基因均用BLAST软件进行注释,其中包括NR、Swissprot、GO、COG、KOG、Pfam和KEGG数据库。共有14550个基因被注释到数据库中。检测所有基因的表达水平,共获得1409个差异表达基因(DEGS,fold change2,p04基因的GO分类根据细胞...
  • 浏览次数: 14
    发布时间: 2019 - 03 - 11
    摘要草莓属配子体不亲和系统的研究已经广为人知了,但是其遗传机制目前仍是未知的。通过人工自花授粉获得了11个不同亲和性的第二世代绿色草莓,用来代表不同的坐果率水平。本研究对两个较大差异坐果率的自交系进行全基因组重测序,Ls-S2-53(自交不亲和)和Ls-S2-76(强自交亲和)。利用完全自交亲和的野草莓作为参考样品,进行两个绿色草莓全基因组变异检测和注释分析。两测序样品间每条染色体上的多态分布都很相似,但是纯合变异的数量和分布区域是不一致的。基因表达分析表明6个和自交不亲和显著相关的候选基因,用野草莓基因组作为参考,将一个FIP2-like(肌动蛋白骨架合成相关)作为两个自交不亲和自交系的候选基因,该基因编码的肽链在两个材料中均存在不同长短的数量的氨基酸数量的丢失。通过抑制FIP2-like的表达减少了花粉管顶端F-actin的合成,在一定程度上抑制了花粉粒的生成和花粉管的发育。研究结果表明差异的纯合变异分布影响了绿色草莓的果实坐果率,完整编码的FIP2-like能够正常促进F-actin的合成,而较短氨基酸序列的FIP2-like对两个自花授粉草莓的亲和性有影响。材料方法植物材料:F.viridis 42,Ls-S1-2,11个Ls-S1-2自交系;测序材料:Ls-S2-53,Ls-S2-76(幼嫩叶片);Ls-S2-53人工自花授粉后(0h)叶、花梗、花萼、花瓣、雌蕊、花药用来做组织特异表达分析,雌蕊自花授粉后(6,12,24,48,72h)做时空表达分析。测序策略:Illumina Hiseq 2500,Ls-S2-53(80X),Ls-S2-76(75X)。参考基因组:F. vesca reference genome v2.0.a1;比对参考基因组:BWA v0.6.1,过滤冗余序列:SAMtools,变异检测:GATK,变异位点注释:SnpEff,基因功能注释:...
  • 浏览次数: 103
    发布时间: 2019 - 01 - 29
    小基因组测序,等待您的加入!客户发表文章:”The Complete Plastid Genome of Magnolia zenii and Genetic Comparison to Magnoliaceae species“        壹俺们很优秀,无奈太低调,悄悄告诉您,俺们公司客户叶绿体文章又有一篇发表啦!集思慧远带着自主研发的叶绿体组装软件为您科研道路上添砖加瓦!下面小编就带您看看,一篇叶绿体文章如何造就!贰                      宝华玉兰的完整质体基因组及其与木兰科植物的遗传比较                           IF=3.098宝华玉兰是一种极度濒危物种,仅存于中国江苏省宝华山有18棵。关于它的分子生物学的信息很少,直到现在还没有对宝华玉兰进行质体基因组研究。本文通过对宝华玉兰(Magnolia Zenii)的完整叶绿体基因组进行测序组装,鉴定SSR,并通过对近缘物种基因组结构和序列数据的比较分析,揭示了5个突变热点,对今后木兰科的系统发育和进化研究具有重要意义。这篇文章的研究内容如下:1、叶绿体基因组组装宝华玉兰基因组长160,048 bp,GC含量为39.2%,包括一对26,596 bp的反向重复区(IRA和IRB),一个大单拷贝区(LRC)88,098 bp,一个小单拷贝区(SSC)18,757 bp.2、木兰科物种叶绿体基因组比较分析用28种木兰科物种和2种鹅掌楸的叶绿体基因组进行序列比对。宝华玉兰的叶绿体基因组放...
  • 浏览次数: 49
    发布时间: 2019 - 01 - 28
    摘要油菜是一种重要的油料作物,为了适应不同的气候带和纬度,形成了三种主要的生态型(冬性,半冬性,春性)。这些生态型多样性背后的遗传机制目前还是未知的。本研究这对收集的世界各地的991份资源品种进行全基因组重测序并分析了这些资源的遗传多样性。测序结果分别和油菜“Darmor-bzh”,“Tapidor”基因组比对鉴定到5.56M/5.53M SNPs,1.86M/1.92M Indels。文章通过构建等位基因漂变图揭示主要群落的,利用遗传多样性和连锁不平衡参数研究了甘蓝型油菜两个亚基因组的非对称进化。选择性清除分析表明了调控各种植物发育和胁迫的直系同源基因间的遗传多样性。全基因组关联分析发现在FT和FLC同源基因的启动子区域的SNP,符合不同生态型的油菜。材料方法实验材料:来自39个国家,658种冬性、145种半冬性、188种春性油菜。测序策略:Illumina HiSeq Xten PE150,共7.9T(平均测序深度6.6X)。油菜参考基因组:‘‘Darmor-bzh’’ genome (B. napus v4.1 genome),‘‘Tapidor’’genome。系统发育分析:MEGA5.2(NJ树,Kimura 2-parameter model);LD分析:PLINK,群体结构:ADMIXTURE;PCA:EIGENSOFT(smartPCA)。SNP重组率计算:R package FastEPRR;等位基因漂移分析:TREEMIX,基因流画图:R package ggplot2。选择性清除:PopGenome(Fst),XP-CLR;关联分析:TASSEL(MLM)。研究结果1、991份油菜资源群体结构和遗传变异A/B.991份油菜资源全球分布情况及对应三种生态型;C.991份材料的系统进化分析(与油菜生态型大致相同);D.群体主成分分析,PC1能够区分冬性和半...
  • 浏览次数: 128
    发布时间: 2018 - 12 - 13
    发表期刊:Postharvest Biology and Technology影响因子:IF=3.112(SCI二区)研究背景草莓(Fragaria×ananassa Duch.)由于其独特的风味和多汁的质地,是一种在世界范围内广受欢迎的园艺作物。它是维生素C和抗氧化剂的良好来源,但由于软化快、机械损坏、真菌腐烂和采后代谢迅速,很容易腐烂。在6℃贮藏1d后,草莓果实中的蔗糖水平由于快速的采后代谢而达到无法检测的水平。虽然草莓品种的贮藏期不同,但平均贮藏期通常只有3-5d。先前研究报道了CO2诱导的生理和机械变化,收获后,草莓果实中含有较高水平的二氧化碳(CO2)以提高可储存性。暴露于20%CO2中12或48h的草莓果实比在环境空气中贮藏3d的水果更结实。高浓度的二氧化碳会影响细胞壁钙的结合,提高果实的硬度。为了深入了解高浓度CO2在分子和生化水平上的影响,多学科方法是必要的。整合基因组学、蛋白质组学和代谢组学将有助于更好地理解植物对外界刺激的全面定性和定量反应。尽管对草莓果实采后对高CO2的响应进行了研究,但对细胞反应的全面了解仍不甚清楚。本研究联合转录组学和代谢组学方法来研究分子和细胞反应,将收获的草莓果实短期暴露于30%CO2,以全面了解改善的果实耐贮性。材料与方法01植物材料与CO2处理草莓于80%红色收获,收获后,果实立即运往实验室。选择大小和颜色一致的果实作为试验材料。分组:0D:环境空气0h(收获后立即)1D:3h环境空气处理后1d1DT:3h 30%CO2处理后1d 02硬度测定随机抽取3个重复容器中的10个草莓果实进行硬度测定(n=30),经硬度测定后丢弃。采用CT-3纹理分析仪进行硬度测量。用直径为100mm、速度为2mm、应变为5mm、直径为100 mm的平板探针,在果实赤道面测量果实硬度(N)。草莓果实表面微生物...
  • 浏览次数: 104
    发布时间: 2018 - 12 - 13
    集思慧远客户发表——《王枣子根、茎和叶的比较转录组分析揭示了王枣子素生物合成的候选基因》英文标题:Comparative transcriptome analysis of roots, stems and leaves Isodon amethystoides reveals candidate genes involved in Wangzaozins biosynthesis杂志:BMC PLANT BIOLOGY影响因子:IF=3.930摘要    王枣子是一种重要的中药植物,具有治疗多种疾病的药理作用,包括肺结核。四环二萜类化合物王枣子素(王枣子甲素Wang zaozin A,王枣子乙素GlucocalyxB)是王枣子的主要生物活性化合物。然而,关于这些化合物生物合成的分子信息仍然不清楚。通过对王枣子中王枣子素积累水平的研究,发现该植物的根、茎和叶组织有很大的变化,表明不同组织间代谢产物生物合成和积累的可能存在差异。为了更好地阐明四环二萜生物合成途径,我们对根、茎和叶组织进行转录组测序,并进行了de novo序列组装和分析。分析了与二萜类生物合成有关的候选基因,如CPS、KSL等。用qRT-PCR方法对8种涉及四环二萜类生物合成的转录本在王枣子不同组织中的表达谱进行了验证,解构该通路的基因表达谱。ISPD、ISPF和ISPH(MEP途径)以及IaCPS和IaKSL(二萜类途径)候选基因在叶片和根中的差异表达,可能是造成王枣子叶片中王枣子素积累较高的原因之一。本文报道的基因组数据和分析为进一步研究这一重要药用植物奠定了基础。材料与方法植物材料:一年生健康王枣子个体的根、茎、叶(3个重复)王枣子素的提取与鉴定(靶标代谢):种类:王枣子甲素、王枣子乙素和王枣子丙素        &...
在线咨询
  • 咨询类别:
  • *
  • 联系人
  • 公司名称:
  • *
  • 公司网址:
  • MSN:
  • QQ:
  • 电话
  • 手机:
  • 传真:
  • E-mail:
  • *
  • 邮政编码:
  • 留言主题:
  • 留言内容
  • *

暴露于Cu-NPs或CuSO4的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

日期: 2018-01-09
浏览次数: 74

点带石斑鱼是一种原生雌雄同体海水鱼,由于其良好的肉质性质,在中国大受欢迎,具有很高的商业价值。最近,由于纳米技术的快速发展,铜纳米粒子(Cu-NPs)在日用消费品以及电子,医疗,生物科学等行业的应用日益增多。尽管纳米技术产品的广泛应用会带来明显的好处,但是对海洋环境的影响以及与水生生物群可能的相互作用的知识却很少见。铜纳米粒子可以积累在水生生物体中,并转移到更高的营养级别,对动物和人类构成健康危害。

应用于纳米毒理学的转录组学和蛋白质组学可能有助于了解不同类型Cu污染物在水生生物体中的主要毒性机制和作用模式,并有助于识别纳米粒子暴露和影响的新颖和无偏见的生物标志物。表征转录组和蛋白质组可能提供了深入了解铜诱导鱼肝反应的分子机制,可能是一种有效的方法来识别新蛋白质,以及评估生态风险。

在本研究中,使用暴露于Cu-NPsCuSO4 24hE. coioides幼鱼的肝脏来表征差异表达的基因和蛋白质,并鉴定对Cu-NPsCuSO4毒性具有特异性的新的分子生物标志物

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

01

材料与方法

1.1粒子特性

通过电感耦合等离子体发射光谱(ICP-OES)确定两个组分中Cu浓度。每个样品6个重复

通过X射线粉末衍射研究在海水中发生的Cu-NP的组成变化。离心后收集样品,经过夜真空干燥。将干燥的样品立即置于气密的小瓶中,并使用X射线粉末衍射进行分析。

1.2鱼的饲养和24h LC50计算

适应后,将6组鱼(每组10只,平均体重3.1±0.2g)随机放入装有50L过滤海水的容器中,然后暴露于不同浓(01.62.43.75.89.0mg Cu L-1)Cu-NPs。在接触期间,鱼不喂食,死鱼也被移除。急性暴露期持续24h,在暴露期结束时评估鱼的死亡率。进行三次重复实验,并且使用概率分析统计方法,使用SPASS Statistics 19.0计算LC50值(p≤0.05)。

1.3点带石斑鱼幼鱼处理及采样

基于24h Cu-NPs急性毒性试验结果,测试了三种处理:对照(不处理)和2.4mg Cu L-1作为Cu-NPCuSO4。每个处理三次重复。24h后从每个重复中随机取出鱼,安乐死后在冰盘上解剖。用肝素化注射器从尾静脉抽取血液进行生化分析。取出肝脏,用生理盐水溶液冲洗脂肪,肝脏在液氮中速冻供后续试验使用。为了进行组织学观察,从每个重复样品的剩余鱼取得肝脏样品(左叶)。

1.4脂肪含量和脂肪酸组成分析

提取E.colioides幼鱼肝脏的脂质,然后通过GC/MS分析样品的脂肪酸组成。为了进行组织化学观察,在低温恒温器切片机上切下冷冻的肝脏(左叶),在4%(v/v)甲醛中固定10min,用油红O染色,用于光学显微镜观察。

1.5转录组学分析

测序平台:Illumina Hiseq2500(Illumina, San Diego, CA,USA)

对照组:SRX2403593CuSO4处理组SRX2403592Cu-NP处理组:SRX2403594

1.6蛋白质组学分析

用于iTRAQ分析的肝脏样品与RNA-Seq相同。

1.7实时荧光定量验证转录组

为了验证转录组数据,选取4个基因(3个上调,1个下调)用于实时PCR。

02

结果与分析

2.1Cu-NPs的特性

1本研究中使用的Cu-NPs的特征

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

S1.Cu-NPsCuSO4在海水中24h后的溶解

2.2组织学观察

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

1.(A)24hCu-NPsCuSO4对幼的毒性(B)暴露于Cu-NPsCuSO4 24hE.colioides幼鱼的肝脏形态

2.3血液学和血浆分析

S1.暴露于Cu-NPsCuSO4 24h对血液和血浆性质的影响

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

2.4维恩图分析

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

2.CuSO4Cu-NPs暴露24hE.colioides幼鱼肝脏中显著差异的基因和蛋白质

2.5转录本和蛋白质的GO功能分类


暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

3.E.colioides转录物和蛋白质的基因本体(GO)功能分类

2.6COG功能分类


暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

4.E.colioides转录物和蛋白质的直系同源基团(COG)功能分类簇

2.7KEGG通路分析

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

S3. E.colioides转录物(上)和蛋白质(下)KEGG通路分析

2.8RNA和蛋白质表达的相关性分析

2.Cu-NPCuSO4处理中相同表达趋势的转录物和蛋白质列表

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

2.9通过mRNA表达验证转录组数据

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

S4.通过四种差异表达基因的实时定量PCR验证转录组数据

2.10肝脏脂质含量与脂肪酸组成


暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析

5. Cu-NPsCuSO4暴露24hE. coioides幼鱼肝脏中的脂质含量和脂肪酸组成

03

总结

在大多数研究中,蛋白质组分析是基于转录本,假设转录组预测的蛋白质几乎可以覆盖定量蛋白质组学发现的所有蛋白质。然而,基因调控涉及复杂的过程,导致转录组分析中的缺陷以及不准确性。因此,仅基于转录组结果来定义蛋白是不够的。在本研究中通过Illumina-seq和iTRAQ使用NCBInr(NR),基因本体论(GO),基因和基因组的京都百科全书(KEGG),直系同源基因簇(COG),Swissport和Uniprot数据库鉴定了基因和蛋白质,专注于在转录水平和翻译水平上一致的上调或下调的蛋白质。

使用暴露于Cu-NPs或CuSO4 24h的E. coioides幼鱼的肝脏来表征差异表达的基因和蛋白质,并鉴定对Cu-NPs或CuSO4毒性具有特异性的新的分子生物标志物。当进行转录组和蛋白质组结果的相关分析时,21个基因/蛋白质显示调节的一致性变化,最显著的是与脂质代谢有关的基因/蛋白质。结果提供了关于急性Cu-NPs或CuSO4暴露的点带石斑鱼响应的重要新信息。

暴露于Cu-NPs或CuSO<sub>4</sub>的点带石斑鱼的转录组学,蛋白组学和生理学分析
参考文献

Integrated transcriptome, proteome and physiology analysis of Epinephelus coioides after exposure to copper nanoparticles or copper sulfate. Nanotoxicology, IF=6.428.





分享到:
回到顶部
相关内容
2019 - 03 - 13
合作单位:江苏大学食品与生物工程学院发表期刊:Food Chemistry影响因子:4.946(SCI二区)研究背景:桔霉素(citrinin,CIT)是一种次生代谢物,最初由桔青霉Penicillium citrinum生产。后来发现它是由曲霉属、红曲属、青霉属等产生的。一些农业食品中报告了CIT的污染情况,包括大米、奶酪、小麦、苹果和其他商业食品。食品中的CIT污染不仅造成重大经济损失,而且对...
2019 - 03 - 11
摘要草莓属配子体不亲和系统的研究已经广为人知了,但是其遗传机制目前仍是未知的。通过人工自花授粉获得了11个不同亲和性的第二世代绿色草莓,用来代表不同的坐果率水平。本研究对两个较大差异坐果率的自交系进行全基因组重测序,Ls-S2-53(自交不亲和)和Ls-S2-76(强自交亲和)。利用完全自交亲和的野草莓作为参考样品,进行两个绿色草莓全基因组变异检测和注释分析。两测序样品间每条染色体上的多态分布都很...
2019 - 01 - 29
小基因组测序,等待您的加入!客户发表文章:”The Complete Plastid Genome of Magnolia zenii and Genetic Comparison to Magnoliaceae species“        壹俺们很优秀,无奈太低调,悄悄告诉您,俺们公司客户叶绿体文章又有一篇发表啦!集思慧远带着自主研发的叶绿体组装软件为...
2019 - 01 - 28
摘要油菜是一种重要的油料作物,为了适应不同的气候带和纬度,形成了三种主要的生态型(冬性,半冬性,春性)。这些生态型多样性背后的遗传机制目前还是未知的。本研究这对收集的世界各地的991份资源品种进行全基因组重测序并分析了这些资源的遗传多样性。测序结果分别和油菜“Darmor-bzh”,“Tapidor”基因组比对鉴定到5.56M/5.53M SNPs,1.86M/1.92M Indels。文章通过构...
Copyright © 2005 - 2013 南京集思慧远生物科技有限公司
犀牛云提供企业云服务
地址:江苏省南京市栖霞区仙林大学城纬地路9号江苏生命科技创新园F6栋522室
技术顾问:025-85381280/025-85380280行政人事:025-83361344
邮箱:tech@genepioneer.com
邮编:330520