KASP 是如何工作的

KASP 基因分型反应包括三个部分：

   1.带有感兴趣序列的 DNA 样本

   2.KASP Assay Mix  （包含目标特异性引物）

   3.KASP-TF 预混液。

       KASP Assay Mix 对目标 SNP 或插入缺失具有特异性，由两种竞争性、等位基因特异性正向引物和一种常见的反向引物组成。每个正向引物都包含一个额外的尾序列，该序列与 KASP-TF 预混液中存在的两个通用 FRET（荧光共振能量转移）盒之一相对应。所有定制的 KASP 检测都可通过额外的检测验证服务获得。

kasp 检测混合物

       KASP-TF Master Mix在优化的缓冲溶液中包含两个通用 FRET 盒（FAM 和 HEX）、ROX™ 被动参比染料、Taq 聚合酶、游离核苷酸和 MgCl 2 。

       基于竞争性等位基因特异性 PCR，可对 SNP 和 In/Dels 进行双等位基因评分。

       KASP™ 基因分型分析基于竞争性等位基因特异性 PCR，可对特定位点的单核苷酸多态性 (SNP) 和插入和缺失 (Indel) 进行双等位基因评分。

       KASP-TF 预混液不含 Triton™ X-100。将 SNP 特异性 KASP Assay mix 和通用 KASP-TF Master Mix 添加到 DNA 样品中，然后进行热循环反应，然后进行终点荧光读数。

       KASP 检测混合物包含三种检测特异性非标记寡核苷酸：两种等位基因特异性正向引物和一种常见的反向引物。等位基因特异性引物各有一个独特的尾序列，与通用 FRET（荧光共振能量转移）盒相对应；一种用 FAM™ 染料标记，另一种用 HEX™ 染料标记。KASP-TF Master Mix 包含通用 FRET 暗盒、ROX™ 被动参考染料、taq 聚合酶、游离核苷酸和 MgCl 2在优化的缓冲溶液中。在热循环过程中，相关的等位基因特异性引物与模板结合并伸长，从而将尾序列连接到新合成的链上。然后在随后的几轮 PCR 中生成等位基因特异性尾序列的互补序列，使 FRET 盒与 DNA 结合。FRET 盒不再淬火并发出荧光。竞争性等位基因特异性 PCR 通过两个等位基因特异性正向引物的竞争性结合来实现双等位基因鉴别。如果给定 SNP 的基因型是纯合的，则只会产生两种可能的荧光信号中的一种。如果基因型是杂合的，则会产生混合荧光信号。