想要做亚细胞定位?先来看看这篇文章吧!

如何研究蛋白质的亚细胞定位？

       亚细胞定位是研究基因功能不可或缺的一种技术手段，可将某种蛋白或者表达产物定位于细胞中的具体位置，从而为理解基因的作用机制提供研究方向。

       成熟蛋白质必须在特定的亚细胞器里面才能发挥稳定的生物学功能。细胞内部可以进一步划分为不同的细胞区域或细胞器，即亚细胞。常见的亚细胞有细胞核、细胞膜、内质网、高尔基体、细胞质、线粒体、叶绿体等（图1）。

图1 细胞结构

       目前研究亚细胞定位最常用的是融合报告基因定位法。即将目标蛋白与荧光蛋白的N端或者C端融合，通过瞬时转化技术或稳定遗传转化技术，使得该融合蛋白在受体材料细胞内表达，目标蛋白会牵引荧光蛋白一起定位到目标细胞器，在扫描共聚焦显微镜的激光照射下会发出绿色荧光，从而可以精确地定位蛋白质的位置。

那么该如何进行亚细胞定位研究呢？

       首先我们需要利用一些生信工具预测蛋白的亚细胞定位，这样就能省时省力节约成本。下面推荐几个在线预测网站：

       1. WoLF PSORT II 亚细胞定位预测工具：https://www.genscript.com/wolf-psort.html?src=leftbar

       2. iPSORT亚细胞定位预测工具：http://ipsort.hgc.jp/

       3. cNLS Mapper 核定位信号预测工具：http://nls-mapper.iab.keio.ac.jp/cgi-bin/NLS_Mapper_form.cgi

       4. SignalP 4.0 Server 信号肽和信号肽剪切位点预测工具：http://www.cbs.dtu.dk/services/SignalP-4.0/

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       预测的定位序列是否正确仍然需要实验来验证，通过构建融合报告基因，将潜在的序列带上GFP标签，在细胞内表达，鉴定该序列能否把游离的GFP带到特定的位置(如细胞核、线粒体等)。

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